定量PCR檢測試劑盒使用時應注意以下方面
瀏覽次數：870發布日期：2021-11-19
定量PCR檢測試劑盒的適用范圍廣，包含一系列生物樣品，如血液、動物、植物、真菌、酵母、細菌和病毒等，簡化實驗步驟，減少大量的核酸純化試劑的消耗，問研究人員節約大量的時間和科研費用。對于商檢、CDS、疾病診斷的用戶，還可以在很大程度上降低污染，包含操作人員的安全。
定量PCR檢測試劑盒使用時應注意以下方面：
1.保存
未拆封的試劑盒，請于-20℃保存；拆封之后，應在4℃保存。在試劑消耗量較少的實驗室，可以考慮將試劑盒的按照組分單獨分裝，后保存在-20℃。
2.配置
PCR試劑盒內所含各組份都是混合物，在靜置情況下會發生分層現象，因此試劑盒現配現用，震蕩混勻，避免反復凍融，避免預混。其中，反復凍融將大幅縮短試劑盒使用壽命。
在擴增體系的選擇時，盡量選擇標準體系，再根據檢材情況加入模板，之后切勿忘記以PCR用水補足擴增體系。
3.切勿預混
因試劑盒中酶的活性較高，將各組份按照比例混合之后，即使沒有達到它的適溫度，但也可能發生與引物結合，導致實驗結果出現丟位點或者雜合子純化等情況。
4.陰陽性參照
實驗結果會受提取、擴增和電泳等多個環節的影響，因此，每次擴增實驗都應該添加一組陰陽性參照。這樣，當結果異常的時，我們就可以結合陰陽性參照的表現，排查問題出在哪個環節。
5.陽性參照是否通用
雖然多數試劑盒的陽性參照都是007，但是案件試劑盒和建庫試劑盒的陽性參照濃度不同，通常來說案件試劑盒的濃度更低，擴增時需選用試劑盒相對應的陽性參照。
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